Resumo:
A biotecnologia utiliza-se de organismos vivos para a produção de bens e serviços. Em processos biotecnológicos, as substâncias de interesse são recuperadas e purificadas por processos downstream e os microrganismos podem ser reaproveitados na forma de biomassas contendo proteínas e outras substâncias produzidas pelo metabolismo microbiano, tais como compostos com atividade antioxidante. Os antioxidantes sintéticos têm sido alvo de questionamentos e estudos revelam que alguns compostos implicam em vários riscos para a saúde, gerando a necessidade pela busca de alternativas naturais. A Saccharomyces cerevisiae é uma levedura frequentemente utilizada para a elaboração de diversos produtos e, ao término do processo produtivo, pode ser recuperada, podendo ser utilizada em outras atividades por possuir componentes de interesse. Sendo assim, o objetivo deste trabalho é caracterizar a biomassa e os extratos etanólico e acetônico de Saccharomyces cerevisiae, comparando a biomassa bruta e os métodos de extração em relação as características físico-químicas. O delineamento experimental é composto por 3 tratamentos com 5 repetições cada, totalizando 15 amostras, que serão submetidas às análises de composição proximal, cor instrumental e concentração de carotenoides. Os resultados serão submetidos à análise de variância e as médias serão comparadas pelo teste de Tukey, com 5 de significância.

Resumo:
A hipertensão arterial é um importante fator de risco para a saúde humana, levando a efeitos celulares deletérios devido ao estresse oxidativo causado. Entre os efeitos indesejáveis da hipertensão está uma menor fertilidade no homem. Os exercícios produzem efeitos comprovados de melhora da saúde geral do indivíduo hipertenso. O objetivo deste projeto é verificar a ação do treinamento intervalado de alta intensidade na expressão gênica de mediadores inflamatórios interleucina 6 (IL6) e fator de necrose tumoral alfa (TNF&#945;) em testículos de ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Para tanto, serão utilizados os testículos colhidos de um experimento anterior já aprovado pelo CEUA. No projeto já realizado, foram utilizados 24 ratos, divididos em 3 grupos: grupo controle Wistar-Kyoto (K-G, n=5), grupo de SHR (SHR-G, n=9) e grupo de SHR submetidos ao treinamento intervalado de alta intensidade (HIIT) em esteira por 50 minutos 5 vezes por semana (SHR-HIIT-G, n=10). Os testículos serão utilizados para RT-qPCR. Após 8 semanas de treinamento os animais foram eutanasiados e os testículos foram colhidos e armazenados no freezer a -80oC. Os testículos armazenados serão triturados e o RNA extraído pelo protocolo do TRIzol®, será realizada a transcrição reversa e posteriormente o DNA complementar será analisado por qPCR. As análises das expressões gênicas relativas de Il6 e Tnf&#945; serão realizadas testando 3 genes endógenos para a escolha de um normalizador da reação utilizando o programa NormFinder®. A análise estatística dos dados relativos de expressão gênica será ANOVA seguida de Tukey ou teste de Kruskal-Wallis seguido de Dunn, dependendo da normalidade dos dados, diferenças serão consideradas para p<0,05. A hipótese científica do presente estudo é que a hipertensão aumentará a expressão de mediadores inflamatórios e que o HIIT modulará os efeitos negativos da hipertensão.

Resumo:
Uma das formas de melhorar os oócitos obtidos para a produção embrionária é através da suplementação das doadoras visando alterar a composição do fluido folicular e consequentemente influenciar na qualidade oocitária. Portanto o objetivo geral do presente projeto é avaliar o efeito da suplementação com Homeo-Vita fertilidade (produto homeopático) em vacas da raça Nelore sobre parâmetros reprodutivos. Para tanto serão utilizadas 20 vacas da raça Nelore que irão os grupos: Grupo controle (GC, n=10) que será fornecido apenas sal mineral e grupo Homeo-Vita Fetilidade® (GHVF, n=10) onde será acrescido ao sal mineral o produto ajustado para um consumo diário de 70g/animal dia por um período de 60 dias. Após o consumo os oócitos serão aspirados por ultrassonografia enviados ao laboratório para a (PIVE) produção in vitro dos embriões. Serão coletadas amostras de sangue para dosar a progesterona plasmática pelo método de radioimunensaio (RIA). Os oócitos obtidos serão selecionados e avaliados quanto à qualidade em os oócitos graus I, II, III, desnudo e atrésico. Os embriões obtidos no dia 7 pós-fecundação serão contados e classificados quanto ao estágio de desenvolvimento (mórula, blastocisto, etc) e qualidade embrionária. Para todas as análises será utilizado o Teste-t de Student para observações independentes, quando entre os 2 grupos. As comparações estatísticas serão utilizadas considerando a associação significativa quando a estatística calculada for menor que 5 (p<0,05).

Resumo:
Objetiva-se investigar a eficácia clínica e a segurança da utilização do bloqueio peridural sacrococcígeo (S3-Co1) como adjuvante da anestesia geral inalatória em gatas submetidas à ovariosalpingohisterectomia. Para o procedimento cirúrgico, todos animais serão tratados com acepromazina (0,05 mg/kg) associada à meperidina (6 mg/kg), por via intramuscular (IM). A indução anestésica será realizada com propofol dose-efeito, seguindo-se a manutenção com isoflurano/O2. Cinco minutos após a estabilização da anestesia inalatória, os animais serão distribuídos em três tratamentos, com 15 animais em cada grupo: EP: administração de 0,3 mL/kg (1,5 mg/kg) de ropivacaína 0,5 no espaço peridural S3-Co1; CN (controle negativo): administração de 0,3 mL/kg de solução salina 0,9 no espaço peridural S3-Co1; CP (controle positivo): administração de 0,3 mL/kg de solução salina 0,9 no espaço peridural S3-Co1, além da administração de meloxicam (0,1 mg/kg, SC), após a intubação traqueal. Durante a cirurgia serão avaliados: frequência cardíaca e respiratória, pressão arterial sistólica, temperatura esofágica, oxicapnografia e concentração final expirada de isoflurano. O grau de analgesia e de sedação serão mensurados antes do procedimento cirúrgico (basal), 1, 2, 4, 8 e 12 horas após extubação traqueal. Em caso de analgesia insuficiente, morfina (0,2 mg/kg, IM) será administrada como analgesia de resgate. Os dados serão analisados com análise de variância com aplicação do teste de Tukey (dados paramétricos) e teste de Kruskall-Wallis e Friedman com pós-teste de Dunn (dados não paramétricos), ao nível de 5 de significância (p < 0,05).

Resumo:
Objetiva-se investigar o efeito sedativo, analgésico e cardiorrespiratório da dexmedetomidina administrada no ponto de acupuntura Vaso Governador 20 (VG-20) e o impacto dessa via de administração sobre a dose e qualidade da indução anestésica, o requerimento intraoperatório de isofluorano e a qualidade da recuperação pós-anestésica, comparativamente, à via intramuscular (IM) em gatas submetidas à ovário-salpingo-histerectomia (OSH). Em estudo clínico, prospectivo, randomizado e encoberto, 30 gatas serão distribuídas em dois tratamentos: medicação pré-anestésica com dexmedetomidina (10 µg/kg) administrada por via IM (grupo IM, n =15) e no ponto de acupuntura VG-20 (grupo VG20, n =15). A indução anestésica será realizada com propofol dose-efeito, sendo registrada a dose (mg/kg) e a qualidade da indução por sistema de escore. A manutenção anestésica será feita com isofluorano/O2., cuja concentração será ajustada para manter plano anestésico cirúrgico. Durante a cirurgia serão avaliados: frequência cardíaca e respiratória, pressão arterial sistólica, temperatura esofágica, oxicapnografia e concentração final expirada de isofluorano. No período pré-operatório e durante 24 horas após a extubação traqueal, serão avaliados o grau de sedação através de escala descritiva numérica e o grau de analgesia através da Escala Composta de Dor de Glasgow-Felina (GCMPS) e a Escala Composta Multidimensional-UNESP-Botucatu (ECM). Nas gatas com ECM &#8805; 6/24 e/ou GCPM &#8805; 5/20, será administrada morfina (0,2 mg/kg, IM) como analgesia de resgate. Os dados serão analisados com teste-t não pareado, teste exato de Fisher, ANOVA com teste de Tukey e teste de Mann-Whitney e Friedman para dados paramétricos e não paramétricos, respectivamente (p < 0,05).

Resumo:
O controle funcional do oviduto é multifatorial e estudos mostram alteração transcricional, proteica e funcional do oviduto durante o ciclo estral, entre os antímeros de ovulação em animais monovulatórios, quanto à presença dos gametas e embrião, número de embriões presentes e concentração plasmática de progesterona. Nessa mesma vertente, trabalhos do nosso grupo de pesquisa já demonstraram efeitos de protocolo de superestimulação ovariana na regulação de transcritos no oviduto bovino relacionado com a contratilidade do oviduto e interação gamética. Embora os estudos foquem na remodelação da matriz extracelular de ovários adultos, nada se sabe sobre os mecanismos que promovem e controlam esses mesmos eventos na ampola ovidutal provenientes de fêmeas bovinas submetidas ou não à superestimulação ovariana. Além disso, os mecanismos de remodelação do tecido pelo qual o oviduto é formado são pouco descritos, principalmente no que diz respeito aos componentes da matriz extracelular. A fim de avaliar possíveis alterações ocasionadas no oviduto após protocolos de SOV, o projeto objetiva analisar o remodelamento tecidual e quantificar o colágeno em ampolas de ovidutos bovinos, por meio da coloração de lâminas histológicas com picrosirius RED provenientes de vacas Nelore submetidas ou não à superestimulação ovariana. Para tanto, ovidutos de fêmeas bovinas submetidas ou não à superestimulação ovariana com hormônio folículo-estimulante (FSH) ou gonadotrofina coriônica equina (eCG) emblocados em parafina serão corados com com picrosirius red e as lâminas serão analisadas e as imagens capturadas com fotomicroscópio digital. Cortes ovidutais corados com picrosirius red PSR serão usados para quantificar o colágeno total e a sua distribuição. A análise será realizada utilizando o ImageJ, seguindo as instruções do software para quantificação de colágeno. Esperamos que a compilação dos dados gerados seja capaz de ampliar o conhecimento sobre os aspectos estruturais e fisiológicos do oviduto bovino e o impacto que as variações hormonais podem gerar em fêmeas bovinas submetidas à superestimulação ovariana.

Resumo:
Resultados promissores na regeneração de lesões de pele, têm sido demonstrados com o uso de produtos de origem natural (orgânicos), como os curativos dérmicos constituídos de polissacarídeos (quitosana complexada com xantana), por promoverem microambiente hidratado e com isolamento térmico, permitindo as trocas gasosas; e fontes ricas em fatores de crescimento como o plasma rico em plaquetas autólogo (PRPa), que apresenta o fator de crescimento transformador beta (TGF-&#946;), endotelial vascular (VEGF) e derivado da plaqueta (PDGF), responsáveis pela estimulação da cascata inflamatória e da cicatrização. O objetivo deste trabalho é avaliar a ação de uma membrana polimérica (quitosana, xantana e &#946;-glicana) e do PRPa na cicatrização in vivo, empregados isoladamente ou associados. Para os testes, coelhos serão submetidos a procedimento cirúrgico para indução da lesão e divididos em grupo controle (GC), grupo membrana (GM), grupo PRPa (GPa) e grupo membrana associada ao PRPa (GMPa), avaliados nos momentos M0, M7, M14, M21 e M28 (28 dias) após o procedimento experimental. Serão realizadas análise da dimensão fractal (DF) e avaliação termográfica. As análises estatísticas dos resultados serão realizadas utilizando o software Statistica 7®, com 5 de significância. Hipotetiza-se que o curativo bioativo à base de quitosana, xantana e &#946;-glicana associado ao PRPa, demonstre características terapêuticas e biológicas relevantes para o tratamento de lesões dermo-epidérmicas, gerando melhor qualidade ao processo cicatricial, contribuindo assim, para o setor de desenvolvimento de biomateriais e aplicação terapêutica dos mesmos.

Resumo:
Biotécnicas como a superestimulação têm se propagado cada vez mais na produção animal melhorando e ampliando o plantel e ainda assim, tem sido alvo de muitos estudos para aprimorar seus índices. O oviduto é uma das estruturas que contem significante importância, transportando as células germinativas e por onde se dá à fusão dos gametas e a geração de um novo individuo, que inicialmente é nutrido pelo fluido ovidutal proveniente de células secretoras ciliadas e não ciliadas, modulados pelos hormônios E2 e P4 e por outros hormônios que possuem papeis ativos na superestimulação ovariana como o FSH, que promove o desenvolvimento de folículos, indução de uma nova onda e aumento da viabilidade dos embriões. Apesar disso ainda existem algumas inconsistências, dado que este trabalho irá abordar em relação ao seu efeito no oviduto. O eCG por outro lado dispõe de uma meia-vida mais prolongada em relação aos demais e o único que apresenta a capacidade de se interagir com os receptores de LH e FSH, compreendendo um aumento na taxa de ovulação, crescimento folicular e maior produção de embriões, entretanto não se porta de alta viabilidade. Embora os estudos foquem na remodelação da matriz extracelular de ovários adultos, nada se sabe sobre os mecanismos que promovem e controlam esses mesmos eventos na ampola ovidutal provenientes de fêmeas bovinas submetidas ou não à superestimulação ovariana. Neste contexto aparece a dimensão fractal (DF), que permite quantificar alterações estruturais dos tecidos, sendo utilizada como ferramenta diagnóstica de retinopatias, estudos histopatológicos de neoplasias, morfometria de hepatócitos, fibrose hepática e estudos cardíacos. A fim de avaliar possíveis alterações ocasionadas no oviduto após protocolos de SOV, as regiões de ampola do oviduto de vacas submetidas ou não serão analisadas através da dimensão fractal, para identificar alterações morfológicas mínimas, por funções quantitativas com o objetivo de investigar o efeito ocasionado na morfologia do oviduto em vacas Nelore submetidas ou não à superestimulação ovariana e remodelamento celular desta região do órgão.

Resumo:
A queimadura é uma importante referência de morbimortalidade mundial cuja reposta do organismo varia conforme sua causa, grau de comprometimento e extensão da lesão. Por estas razões, não pode ser classificada como evento patofisiológico simples, mas sim como perdas estruturais e funcionais que podem comprometer vários sistemas do organismo simultaneamente. O tratamento das queimaduras envolve cuidados locais e sistêmicos de acordo com a profundidade, localização corporal e extensão da lesão. O uso de curativos contendo substâncias cicatrizantes e anti-infecciosas é uma das opções para a terapia local. Avanços no campo da engenharia de tecidos demonstram que a fibrina rica em plaquetas (PRF), foi desenvolvida devido às suas propriedades antecipadas na regeneração dos tecidos e na cicatrização de feridas, podendo ser um grande potencial em feridas complexas como as de queimados. O objetivo do presente estudo será avaliar colágeno em queimaduras induzidas experimentalmente em coelhos tratadas ou não com FRP. Serão utilizados 10 coelhos da raça Nova Zelândia, machos, adultos, distribuídos em dois grupos: grupo C-controle (G1/n=5), receberão tratamento padrão para queimaduras (5g de creme a base de sulfodiazina de prata a 1), grupo T (G2/n=5), tratados com FRP. Cada coelho terá sua região dorsal tricotomizada e dividida em quatro quadrantes equidistantes. Para indução das lesões, será realizada anestesia local prévia com lidocaína a 0,2 (0,2 ml, via subcutânea/quadrante), e após 2 min serão feitas queimaduras com barra de ferro padronizada (5 cm2), aquecida em banho de água fervente, por um período de 10 seg/quadrante. Após este procedimento, os animais receberão cloridrato de Tramadol (4,0mg/Kg, IM), 2 vezes ao dia durante 3 dias consecutivos, a fim de minimizar o desconforto inicial. Em seguida será colocado um curativo sobre todas as feridas utilizando ryon estéril e curativo adesivo (Band Aid®). A primeira troca será feita com 24 horas e permanecerá por mais três dias. A partir disso, as trocas ocorrerão a cada 3 dias até completarem 30 dias de experimento. As biópsias de pele serão realizadas aos 7,14 21 e 30 dias pós-lesão utilizando punch de 6 mm. A análise estatística será realizada com o programa estatístico JMP, versão 7.0 (SAS) a partir do teste de normalidade dos dados e de homogeneidade de variâncias entre grupos. Caso a distribuição dos dados seja normal ou não-normal, os efeitos serão testados por ANOVA ou Kruskal-Wallis, respectivamente. Os testes de Tukey ou de Dunn serão utilizados para a comparação caso sejam indicadas diferenças por ANOVA ou Kruskal-Wallis, respectivamente. Os dados serão demonstrados por média ± desvio-padrão. Diferenças serão consideradas significativas quando P<0,05.

Resumo:
O objetivo desta pesquisa é verificar o efeito da suplementação de quercetina na expressão gênica de Tnf&#945; e Il6 nos testículos de ratos alimentados com dieta hipercalórica. Para tanto, serão utilizados testículos já colhidos e armazenados de um experimento anterior (protocolo CEUA 3567). O experimento já realizado utilizou 42 ratos Wistar em 6 grupos experimentais: CT (ratos alimentados com ração comercial e suplementados com goma de 0 mg/dia de quercetina); Q10 (ratos alimentados com ração comercial e suplementados com goma de 10 mg/dia de quercetina); Q20 (ratos alimentados com ração comercial e suplemntados com goma de 20 mg/dia de quercetina); HC (ratos alimentados com ração hipercalórica e suplementados com goma de 0 mg/dia de quercetina); HCQ10 (ratos alimentados com ração hipercalórica e suplementados com goma de 10 mg/dia de quercetina); e HCQ20 (ratos alimentados com ração hipercalórica e suplemntados com goma de 20 mg/dia de quercetina). Ao final do experimento, os ratos foram anestesiados e mortos por exsanguinação, os testículos colhidos e armazenados em freezer a -80°C serão triturados em homogeneizador de tecidos e submetidos a extração de RNA total de TRIzol® seguida da RT-qPCR para verificar a expressão quantitativa relativa dos genes inflamatórios Tnf&#945; e Il6. Para a escolha do melhor endógeno entre os três testados (Gapdh, Rps18 e Hprt1) como referência da expressão gênica quantitativa será utilizado o programa NormFinder®. Os resultados serão analisados quanto ao pressuposto de normalidade de Shapiro-Wilk, caso passe no teste de normalidade será realizada a ANOVA seguida de Tukey, do contrário, será realizado o teste de Kruskal-Wallis seguido de Dunn (P<0,05).

Resumo:
Resultados promissores na regeneração de lesões de pele, têm sido demonstrados com o uso de produtos de origem natural (orgânicos), como os curativos dérmicos constituídos de polissacarídeos (quitosana complexada com xantana), por promoverem microambiente hidratado e com isolamento térmico, permitindo as trocas gasosas; e fontes ricas em fatores de crescimento como o plasma rico em plaquetas autólogo (PRPa), que apresenta o fator de crescimento transformador beta (TGF-&#946;), endotelial vascular (VEGF) e derivado da plaqueta (PDGF), responsáveis pela estimulação da cascata inflamatória e da cicatrização. O objetivo deste trabalho é avaliar a ação de uma membrana polimérica (quitosana, xantana e &#946;-glicana) e do PRPa na cicatrização in vivo, empregados isoladamente ou associados. Para os testes, coelhos serão submetidos a procedimento cirúrgico para indução da lesão e divididos em grupo controle (GC), grupo membrana (GM), grupo PRPa (GPa) e grupo membrana associada ao PRPa (GMPa), avaliados nos momentos M0, M7, M14, M21 e M28 (28 dias) após o procedimento experimental. O animal será pesado e na avaliação da cicatrização será observado, cor e exsudação da ferida, presença de infecção e inflamação, formação de tecido de granulação, cicatricial e necrótico. Serão realizadas análise morfológica, morfométrica e histológica com quantificação do colágeno reparativo ou de remodelação (tipo I e III), diretamente ligados a matriz extracelular (MEC) e extração e quantificação dos glicosaminoglicanos (GAG). As análises estatísticas dos resultados serão realizadas utilizando o software Statistica 7®, com 5 de significância. Espera-se, ao final deste estudo, que o curativo bioativo à base de quitosana, xantana e &#946;-glicana associado ao PRPa, demonstre características terapêuticas e biológicas relevantes para o tratamento de lesões dermo-epidérmicas, gerando melhor qualidade ao processo cicatricial, com maior liberação de fatores de crescimento, e menor susceptibilidade a infecções; contribuindo assim, para o setor de desenvolvimento de biomateriais e aplicação terapêutica dos mesmos.

Resumo:
A partir do momento em que o veneno de Lachesis entra na circulação causa várias reações sistêmicas, a ação da ozonioterapia sobre o metabolismo em desequilíbrio pode ser uma alternativa interessante em casos de acidentes ofídicos, principalmente no tratamento dos efeitos sistêmicos do veneno, tornando necessários estudos que comprovem sua eficácia. O objetivo da pesquisa é avaliar o efeito hepático da ozonioterapia em ratos Wistar inoculados com veneno de serpentes do gênero Lachesis spp. por meio das dosagens séricas de aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalina (FA). Para execução da pesquisa, após aprovação da Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA), serão utilizadas 120 amostras de sangue, material armazenado do projeto cadastrado e aprovado sob o protocolo número 5487, para dosagem das enzimas hepáticas AST, ALT e FA. As dosagens serão realizadas no laboratório de Patologia Clínica do Hospital Veterinário da Unoeste. A comparação dos momentos em cada grupo será feita pelo teste não paramétrico de Friedmann. As variáveis paramétricas serão avaliadas pelo teste ANOVA One-way, com contrastes pelo método de tukey. Será adotado o nível de significância de 5.

Resumo:
A ozonioterapia é uma técnica que a utiliza gás ozônio como agente terapêutico no tratamento de diversas patologias. É um tratamento de fácil aplicação, eficiente e de baixo custo. Embora os efeitos terapêuticos do ozônio tenham sido pesquisados em vários processos fisiopatológicos. No Brasil, a ozonioterapia é utilizada principalmente em distúrbios que envolvam a circulação sanguínea. O objetivo da pesquisa é analisar o perfil hematológico de ratos Wistar inoculados com veneno de serpentes do gênero Lachesis spp. que foram submetidos a ozonioterapia. Para execução da pesquisa, após aprovação da Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA), serão utilizadas 120 amostras de sangue, material armazenado do projeto cadastrado e aprovado sob o protocolo número 5487, para avaliação dos parâmetros hematológicos, eritrograma e leucograma. As dosagens serão realizadas no laboratório de Patologia Clínica do Hospital Veterinário da Unoeste eseus resultados submetidos a análise estatística.

Resumo:
A estratégia de associação de genes com ação biológica conhecida e características de interesse econômico é bastante abordada na produção animal e vários são os genes candidatos. A transcriptase reversa (RT) seguida de quantificação utilizando a técnica da reação em cadeia da polimerase (qPCR) em tempo real ou, é um método in vitro para amplificação enzimática de sequências definidas de DNA complementar obtido a partir do RNA. Esse projeto foi delineado com o objetivo de determinar o efeito da suplementação de borregas terminadas em diferentes planos nutricionais na expressão gênica dos genes endógenos hidroximetilbilanosintase, beta-2-microglobulina e proteína ligadora de TATA box, no amaciamento de carne ovina. Serão utilizadas amostras do músculo Longissimus lumborum de 24 borregas, distribuídas em 3 grupos: G1 (70 a 80 da exigência nutricional),G2 (100 a 110 da exigência) e G3 (confinamento, fornecido 140 da exigência). Será realizada a extração de RNA para a análise da expressão gênica, submetidos ao protocolo de extração do TRIzol®. A concentração do RNA total recuperado e a razão 260/280 serão mensuradas por NanoDrop®. Todas as amostras de RNA total serão tratadas com DNAse antes de serem submetidas ao RT-qPCR, conforme as instruções do protocolo DNAse I. A transcrição reversa será realizada utilizando o protocolo da Superscript® III seguindo protocolo do fabricante. A qPCR será realizada para a análise quantitativa da expressão gênica relativa. Como controle interno das reações de PCR em tempo real serão utilizados 1 gene alvo: Calpaína 2 (CAPN2) e 3 genes endógenos: &#946;-2-microglobulina (B2M), hidroximetilbilianesintase (HMBS) e gene da proteína ligadora de TATA box (TBP). O endógeno de escolha será o mais estável ou a combinação mais estável, verificado pelo programa NormFinder software® com a finalidade de normalizar os resultados obtidos para o gene-alvo. Os "primers" para os genes endógenos e alvos e suas respectivas sondas serão obtidos a partir de ensaios TaqMan®, já padronizados.

Resumo:
É possível modificar a expressão de genes relacionados com a qualidade da carne, modificando os planos nutricionais dos animais. Apesar do importante papel das calpaínas na maturação, é o efeito inibidor de proteólise da calpastatina, igualmente ativada pelo íon cálcio livre no sarcoplasma, que apresenta maior correlação com a maciez da carne conservada sob refrigeração, atua como inibidor endógeno das calpaínas e, portanto, diminui a taxa e extensão da proteólise no músculo esquelético. Esse projeto foi elaborado com o objetivo de determinar o efeito da suplementação de borregas terminadas em diferentes planos nutricionais na expressão gênica da proteína do gene da calpastatina. Serão utilizadas amostras do músculo Longissimus lumborum de 24 borregas, distribuídas em 3 grupos: G1 (70 a 80 da exigência nutricional), G2 (100 a 110 da exigência) e G3 (confinamento, fornecido 140 da exigência). Será realizada a extração de RNA para a análise da expressão gênica, submetidos ao protocolo de extração do TRIzol®. A concentração do RNA total recuperado e a razão 260/280 serão mensuradas por NanoDrop®. Todas as amostras de RNA total serão tratadas com DNAse antes de serem submetidas ao RT-qPCR, conforme as instruções do protocolo DNAse I. A transcrição reversa será realizada utilizando o protocolo da Superscript® III seguindo protocolo do fabricante. A qPCR será realizada para a análise quantitativa da expressão gênica relativa. Os "primer" para o gene-alvo que é correlacionado com qualidade da carne será: calpastatina (CAST). Como controle interno das reações de PCR em tempo real serão utilizados 3 genes endógenos: &#946;-2-microglobulina (B2M), hidroximetilbilianesintase (HMBS) e gene da proteína ligadora de TATA box (TBP). O endógeno de escolha será o mais estável ou a combinação mais estável, verificado pelo programa NormFinder software® com a finalidade de normalizar os resultados obtidos para o gene-alvo. Os "primers" para os genes endógenos e alvos e suas respectivas sondas serão obtidos a partir de ensaios TaqMan®, já padronizados. Na análise de expressão gênica da caspase-3 entre os diferentes grupos será utilizado o procedimento do PROC GLM do programa SAS (STATISTICAL ANALYSIS SYSTEM, 2011) e as médias dos quadrados mínimos serão comparadas pelo teste Tukey, considerando-se como nível de significância estatística o valor de 5.

Resumo:
Atualmente concentrada em animais para lida no campo e esporte, a equinocultura no Brasil representa um mercado em constante crescimento. Neste patamar, onde os equinos possuem uma ampla diversidade de endoparasitas, diretamente associados a doenças gastrointestinais graves, incluindo a síndrome cólica, a prevenção e controle de parasitas se torna imprescindível por meio de terapias alternativas desvinculadas da alta resistência medicamentosa. Este projeto tem como objetivo avaliar a eficácia do controle homeopático na verminose em equinos, com a análise e observações de exame hematológicos, ovos por grama (OPG) e coprocultura seriados, por um período de três meses. Serão avaliados doze equinos sem determinação de raça, sexo ou idade, provenientes do Hospital Veterinário Universitário da UNOESTE em Presidente Prudente, separados em dois grupos (A e B) randomizados de acordo com a carga parasitária, deixando homogêneos e estudados nas mesmas condições de clima, ambiente e nutrição, sendo que os animais de ambos os grupos receberão ração de forma randomizada, onde para um grupo será fornecido o produto homeopático e para o outro grupo apenas placebo. Os dois grupos serão submetidos a exames propostos de forma seriada a cada 15 dias (M0, M15, M30, M45, M60, M75, M90, M105 e M120) durante quatro meses (120 dias). O estudo se justifica em razão da alta resistência de antiparasitários nos equinos, além de sensibilizar e estimular respostas quanto a funcionalidade e real eficácia da homeopatia na verminose nesta espécie, já que não há estudos hoje, que comprovem sua ação, além de visar a efetiva melhora no bem-estar e desempenho animal, promovendo o controle efetivo das verminoses em equinos.

Resumo:
Um problema de saúde pública é o constante aumento da resistência antimicrobiana o que leva ao aparecimento de cepas resistentes como o Staphylococcus aureus (bactéria gram-positiva) e cepas de meticilina multirresistentes e resistentes à S. aureus (MRSA), no entanto encontramos Staphylococcus aureus sensível à meticilina (MSSA). O plasma rico em plaquetas (PRP) vem sendo muito utilizado para aplicações clínicas, no entanto, ainda se sabe muito pouco sobre suas atividades antimicrobianas, no entanto, notou-se que suas propriedades antimicrobianas são específicas para estirpes bacterianas e inibem o crescimento de MRSA e MSSA. A defesa antibactericida das plaquetas age como uma primeira linha contra microrganismos invasores, e seu potencial antibacteriano pode ser aumentado por meio da concentração de componentes celulares presentes no PRP. A falta de estudos, a padronização das técnicas, a insuficiente descrição dos procedimentos adotados e a possibilidade de incluir diferentes concentrações de substâncias é que estimulou a realização deste estuso. Por essas razões, a hipótese do trabalho é que o PRP pode possuir propriedades antimicrobianas ao se utilizar como agente bactericida, através do seu uso como tratamento alternativo a infecções complicadas por MSSA e MRSA.

Resumo:
A resistência aos antibióticos tem aumentado constantemente, está se desenvolve rapidamente representando um problema de saúde em todo o mundo, sem advento de novas medicações no mercado estamos vivendo uma era pós-antibiótica onde até infecções simples tendem a se tornar intratáveis e geram altos custos em seu tratamento. O Staphylococcus aureus uma bactéria gram-positiva é uma cepa clinicamente relevante por ser uma causa comum de infecções. O Plasma rico em plaquetas (PRP) se trata de um concentrado de sangue com mais de 30 fatores de crescimento que vem sendo muito utilizado em várias áreas multidisciplinares mostrando resultados promissores especialmente em regeneração tecidual, diversas características do PRP indicam que ele pode ter também propriedades antimicrobianas. A defesa antibactericida das plaquetas tem sido associada a liberação de proteínas microbicidas plaquetárias (PMP), e a várias quimiocinas que compartilham estruturas semelhantes com os peptídeos antimicrobianos (PAM). Nas últimas décadas, vários tipos de preparações de PRP foram desenvolvidos, como os leucócitos desempenham um papel importante na defesa inata do hospedeiro, os efeitos antibacterianos podem aumentar com sua presença em comparação com as frações que contêm plaquetas isoladamente. Será realizado um estudo randomizado in vitro onde testaremos o efeito bactericida do Plasma rico em plaquetas, Plasma rico em plaquetas puro e Leucócitos em MRSA e MSSA através de Perfil antimicrobiano plaquetário in vitro pelo método Kill curve assay (contagem de UFC/mL) observando se a presença de leucócitos apresenta relação com o efeito microbicida dos concentrados plaquetários.

Resumo:
A polispermia durante a fertilização in vitro ainda é uma importante limitação nos avanços da produção in vitro de embriões bovino, resultando em redução do desenvolvimento embrionário, morte embrionária precoce ou aborto espontâneo. Sabe-se que o enrijecimento da zona pelúcida (ZP) após a liberação dos grânulos corticais oocitários é um importante evento de controle da polispermia. Adicionalmente, estudos recentes mostraram que fatores produzidos pelo oviduto atuam em um enrijecimento da ZP pré-fertilização. Um possível fator envolvido nesse evento é a a-L-fucosidase (FUCA), uma glicoproteína que catalisa a hidrólise da L-Fucose, substrato contido na ZP. Portanto, para avaliar a participação da FUCA no enrijecimento da ZP pré-fertilização e controle da polispermia, esse estudo objetiva avaliar o efeito da adição da FUCA durante os processos de produção in vitro de embriões bovino. Oócitos bovinos serão incubados por uma hora com FUCA após a maturação in vitro, e submetidos à fertilização in vitro sob três condições experimentais correlacionadas com aumento da polispermia: procedimento in vitro padrão, oócitos envelhecidos e alta concentração espermática. Para avaliação da ação da FUCA no controle de polispermia, três análises serão realizadas: tempo de digestão da ZP, porcentagem de fertilização monospérmica e expressão gênica em blastocisto. Espera-se que a aproximação dos fatores ovidutais in vivo ao procedimento in vitro seja uma importante estratégia para melhoramento da eficiência e qualidade de embriões produzidos in vitro.

Resumo:
A toxocaríase é uma importante geozoonose, causada pela migração tecidual de larvas de Toxocara canis, e transmitida ao homem principalmente pela ingestão acidental de ovos embrionados presentes em areia. Embora várias medidas profiláticas sejam recomendadas para reduzir a contaminação ambiental por ovos de Toxocara spp., o tratamento de areia por agentes físico-químicos é uma alternativa de controle pouco estudada. O presente estudo tem como objetivo avaliar a eficácia da higienização da areia por tratamento térmico ou pela caleação utilizando amostras de areia contaminadas artificialmente com ovos de Toxocara canis (n = 100). Para a realização do tratamento térmico as amostras serão submetidas a duas temperaturas diferentes (70ºC ou 80ºC). No tratamento pela caleação, serão utilizadas duas concentrações de cal hidratada (30 e 50) em relação à matéria seca da areia. A análise das amostras ocorrerá 24 horas, 30 e 60 dias após o tratamento, quando os ovos serão recuperados do solo através de uma técnica de centrifugo-sedimentação, após filtragem seriada em tamises de diferentes diâmetros (300, 212, 106 e 38 µm). Os ovos serão classificados quanto às suas características morfológicas após o tratamento. A eficiência dos processos de higienização será avaliada levando-se em consideração os ovos recuperados nas amostras tratadas e nas do grupo controle positivo (contaminado com 100 ovos e sem tratamento; n = 2).

Resumo:
Ancylostoma spp. é um dos geohelmintos mais frequentes no mundo. O solo de locais públicos pode ser contaminado através das fezes de cães e gatos infectados. As larvas de Ancylostoma spp. podem penetrar ativamente pela pele de seres humanos provocando a síndrome de larva migrans cutânea. Essa doença é ocasionada pela migração da larva pela pele resultando na formação de lesão serpiginosa com eritema e prurido intenso. Entre as medidas de redução da contaminação ambiental por Ancylostoma spp. estão a eliminação de fezes de cães e gatos de locais públicos e tratamento anti-helmíntico dos pets. Embora existam medidas profiláticas para a redução da contaminação do solo por Ancylostoma spp., métodos para a higienização direta do solo contaminado são escassos na literatura. O objetivo do presente estudo é avaliar a eficiência do tratamento térmico pelo calor e da caleação sobre a viabilidade de ovos e larvas de Ancylostoma spp. em areia artificialmente contaminada. Amostras de areia (45 g) previamente esterilizadas serão contaminadas com 100 ovos de Ancylostoma spp. obtidos em amostras de fezes de cão/gato. As amostras de solo serão submetidas ao calor (700C e 800C) e pela caleação (30 e 50). Após 24 horas, 30 dias e 60 dias, seis amostras contaminadas, em cada momento, serão analisadas para avaliar a redução de ovos/larvas presentes no solo, e a eficiência da higienização. Os dados serão submetidos ao teste t ou ao teste não paramétrico de Mann-Whitney, e pela Análise de Variância, considerando-se significância a 5.

Resumo:
Objetiva-se investigar a eficácia da farmacopuntura e da aquapuntura como métodos adjuvantes de analgesia na ovário-salpingo-histerectomia (OSH) felina. Quarente e cinco gatas, serão sedadas com dexmedetomidina (10 µg/kg), por via intramuscular (IM). A indução anestésica será realizada com propofol, seguindo-se a manutenção com isofluorano/O2. Dez minutos após a indução anestésica, os animais serão distribuídos em três tratamentos: GLID (n=15): administração subcutânea bilateral de lidocaína (1mg/kg) nos pontos de acupuntura estômago 36 (E36) e baço pâncreas 6 (BP6); GSAL (n=15): administração subcutânea bilateral de solução salina nos mesmos pontos de acupuntura; GC (n=15): não será feito nenhum estímulo em pontos de acupuntura. Durante o procedimento cirúrgico serão avaliados: frequência cardíaca e respiratória, pressão arterial sistólica, temperatura esofágica, oxicapnografia e concentração final expirada de isofluorano. Durante as primeiras 24 horas após a extubação traqueal, o grau de analgesia será mensurado utilizando-se a Escala Analógica Visual Interativa e Dinâmica (IVAS) e a Escala Composta Multidimensional-UNESP-Botucatu (ECM). Nas gatas com ECM > 6, morfina (0,2 mg/kg, IM) será administrada como analgesia de resgate. Os dados serão avaliados com teste qui-quadrado, ANOVA com teste de Tukey e teste de Kruskall-Wallis e Friedman para dados paramétricos e não paramétricos, respectivamente (p < 0,05).

Resumo:
A terminação de animais jovens (cordeiros) tem sido importante alternativa na ovinocultura e o sistema de terminação no confinamento é uma possibilidade viável, vários ciclos por ano, melhor acompanhamento do manejo, controle sanitário, grande quantidade de cordeiros por ano, em contrapartida, o sistema é oneroso e não traz a exatidão de qualidade no produto final. Uma alternativa para os produtores do oeste paulista, está no uso dos carotenoides. Entre os carotenoides, há a bixina com sua capacidade de retardar processos oxidativos, reduzir o colesterol, atividades decorrentes especialmente de sua capacidade de neutralizar radicais livres, contudo há escassez de estudos que avaliem a atividade da bixina na produção animal com a demanda de mercado. O objetivo deste trabalho será avaliar o perfil metabolico, analisando as proteínas totais, creatinina, albumina, uréia, cálcio, magnésio, fósforo, asparto aminotransferase, gama glutamil transpeptidase, glicose, colesterol e triglicerídeos de cordeiros mestiços Dorper, alimentados com diferentes níveis de bixina em pó, em confinamento. O material a ser colhido, será proveniente de 30 cordeiros machos mestiços Dorper, os quais foram incialmente divididos em dois grupos (n=15), com peso médio inicial de 18kg e idade média de 80 dias, alocados em baias separadas, e distribuídos em blocos casualizados de acordo com o peso. Os tratamentos fornecidos foram: ração comercial, com adição de 0,003 (T1) e 0,006 (T2), g/kg de bixina em pó, com base na matéria seca da dieta. Ao atingirem o peso vivo médio pré estabelecido de 35 kg, foram abatidos em frigorífico comercial e procedeu-se a coleta de sangue dos cordeiros, através da venopunção jugular em tubos de ensaio Vacutainer isentos de anticoagulante (EDTA) para a dosagem do bioquímico. As amostras de soro foram armazenadas para posterior analise e serão quantificadas para: cálcio, fósforo, magnésio, AST, GGT, proteínas totais (proteína+albumina+globulina), lactato e creatinina. Também serão analisados os níveis de uréia e glicose, sendo todas as amostras analisadas no laboratório de Análises Clínicas do Hospital Veterinário da Universidade do Oeste paulista. Os dados serão submetidos à análise de variância, com 5 de significância.

Resumo:
Oócitos e embriões são expostos sequencialmente a diferentes meios de cultura em protocolos in vitro padrão. Tipicamente, um meio diferente é usado para cada fase da produção de embriões in vitro (PIV); maturação (MIV), fertilização (FIV) e cultivo in vitro dos zigotos (CIV). Porém o desenvolvimento de um único meio para as diferentes etapas da PIV é um importante passo para a simplificação desta biotécnica. Desta forma, o objetivo deste projeto é avaliar a progressão nuclear e expressão de genes relacionados à maturação em oócitos bovinos maturados em meio SOF o qual, no protocolo padrão, é utilizado na CIV. Para tanto, oócitos obtidos de abatedouro serão selecionados e os de grau I e II serão maturados in vitro utilizando dois meios, meio MIV convencional e SOF convencional. Após 22 a 24 horas os oócitos dos grupos G-SOF (n=140) e G-MIV (n=140), 140 oócitos de cada grupo (perfazendo 7 repetições) serão submetidos a coloração de Hoechst para avaliação por microscopia de epifluorescência da progressão nuclear e o núcleo será classificado em VG, QVG, MI e MII. Os efeitos da utilização do meio SOF sobre a progressão nuclear serão analisados empregando o teste do Qui-quadrado (&#967;2). As diferenças serão consideradas significativas ao nível de 5 de significância (p<0,05).

Resumo:
Os animais de estimação, cães ou gatos, estão suprindo as necessidades de companhia das pessoas, alterando desta forma o comportamento dos tutores em relação a exigência e compra de alimentos, o que impulsiona a indústria de rações a buscar ingredientes alternativos para as formulações. Anualmente diversos produtos são lançados no mercado pet, e a avaliação desses alimentos é de extrema importância. Desta forma o O objetivo do presente trabalho será avaliar consumo, pH e densidade urinária e escore fecal em gatos alimentados com alimento úmido grain free utilizando diferentes fontes de proteína (bovina, cordeiro, pato e jacaré). O experimento será realizado no gatil da Universidade do Oeste Paulista (Unoeste) em Presidente PrudenteSP, utilizando 8 gatos (machos e fêmeas) com idade entre 1 e 5 anos, sendo todos de raça não definida. Será utilizado o delineamento em quadrado latino 4 x 4 (4 gatos x 4 períodos), e cada quadrado latino contará com 2 animais, havendo rodízio dos animais em cada período do quadrado latino. O período total do experimento será de 40 dias, sendo 5 dias de adaptação às dietas e 5 dias de período de avaliação (coletas). Assim, serão testados 4 tratamentos, consistindo nas diferentes fontes proteicas em dietas úmidas grain free sendo, controle (proteína bovina) e 3 bases proteicas de cordeiro, pato e jacaré utilizando 4 repetições de 2 gatos cada, totalizando 8 gatos em cada tratamento. Serão avaliados consumo alimentar, escore fecal, pH e densidade urinária. Os dados serão submetidos à Análise de Variância e em caso de diferença significativa, as médias serão comparadas por meio do teste de Tukey utilizando nível de significância de 5 (p<0,05).